软件
SymPhoTime 64
荧光寿命成像和相关(Correlation)测量软件
- 单点，2D，和3D的TTTR数据采集，包含有可在线预览FLIM，FCS，time trace和TCSPC数据的功能
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FLIM，快速FLIM，FLIM-FRET
- FCS，FCCS，FLCS，PIE-FCS，符合相关，总相关
- FRET，PIE - FRET，荧光time trace，各向异性
- TCSPC寿命拟合，包括先进的误差分析
- 基于"STUPSLANG"语言的用户自定义编译脚本功能
SymPhoTime 64是一款集数据采集和分析为一身的软件，它被用来控制MicroTime 200，MicroTime 100，及LSM升级系统这三种显微共聚焦系统，和其他TCSPC设备。该软件需要在64位操作系统下工作，拥有简单易懂的用户操作界面。结构清晰，功能强大，使用户可以更高效的获取数据分析结果，并可以通过Workspace模式更加直观的管理数据。最后，通过基于"STUPSLANG"语言的用户自定义编译脚本功能，用户可以任意改变分析和测量的具体步骤。
使用PicoQuant TCSPC模块测量数据
SymPhoTime 64专门为与PicoQuant时间分辨共聚焦显微系统联用而设计，例如MicroTime 200，MicroTime 100以及LSM升级系统。同时，还可以与各种基于PicoQuant TCSPC设备搭建的自建系统联用。SymPhoTime 64软件具有独特的时间标记模式，在这个模式下，每个通道探测到的所有光子的绝对抵达时间都被记录，这样，基于这样详尽的数据信息，用户可以进行从简单的TCSPC柱状图分析，到复杂的寿命成像和相关分析。
专业化的成像分析
使用SymPhoTime 64分析成像数据，简单而有效。其操作界面包含有许多标准的成像分析模块，例如FLIM，FRET和各向异性分析。用户可以根据分析需求选择对应的专业数据分析方向，从而得到准确的数据。
超快的软件相关器
SymPhoTime 64在荧光相关光谱方面有专门的分析模块。这些围绕相关分析的拟合模块包括：经典的自相关荧光相关光谱(FCS)，互相关光谱(FCCS)和总相关分析。而通过时间标记模式，符合相关的分析也是可以做到的。得益于当前多核处理器的强大性能，SymPhoTime 64是当前最快的软件相关器。
强度Time trace分析
荧光强度Time trace分析是SymPhoTime 64另一项主要功能。荧光强度Time trace包含有荧光动态学信息，可以从多方面进行分析，例如ON/OFF柱状图分析，爆发量柱状图，以及荧光寿命Trace分析。
STED超分辨
SymPhoTime 64支持基于MicroTime 200的超分辨STED系统。不同的数据采集功能以及STED专用激光的操作界面都集成到了SPT 64中。在数据采集的同时，STED成像和时间 - 门控下的gSTED图像可以在线显示。图片后续处理模块，包括gSTED和Pattern Matching可以被用来进一步提升STED分辨率。软件同时还具有STED - FCS功能。
软件版本
该软件目前有5种版本，每种对应不同的需求：
- SPT64 1A "SymPhoTime 64": 支持单点测量
- SPT64 1 "SymPhoTime 64": 支持单点测量及数据分析
- SPT64 2 "SymPhoTime 64": 支持2D和3D数据采集及分析
- SPT64 1+2 "SymPhoTime 64": 完整版
- SPT64 1+2+3 "SymPhoTime 64": STED版完整版
当前软件版本：2.4
最新的软件版本支持MultiHarp 150，高速FLIM，以及来自PI的E727压电平移台，C867大范围平移台。软件由特殊的USB加密狗保护，在加密狗接入电脑并且能被正确识别时，软件才能运作。
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数据采集 |
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可联用TCSPC模块 |
HydraHarp
400, PicoHarp 300, TimeHarp 260, MultiHarp 150 |
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可联用荧光系统 |
MicroTime
200
激光扫描显微系统 (LSM)，支持Nikon, Olympus或 Zeiss品牌 |
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探测通道数量 |
1 到 8 detectors |
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采集模式 |
单点采集，多点采集，2D成像(XY，XZ，YZ)，3D成像(XYZ)，定时成像(XYT)，用于调节系统时使用的示波器模式
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采集预览 |
FLIM,
FCS, FLCS 和FCCS, Time Trace, TCSPC柱状图 |
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自动化测量 |
Z轴逐层成像, 定时成像, 图片缝合, 多点测量 |
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硬件控制 |
PDL
828 "Sepia II" 激光驱动器
MicroTime
200的快门系统 |
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数据分析 |
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总体特点 |
时间门控
TCSPC binning 最小平方拟合, 最大可能性估算拟合, IRF解卷积拟合，尾部拟合，自举误差分析 TCSPC曲线的全局化分析 图形化交互界面 |
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成像 |
FLIM, FLIM-FRET, 荧光强度FRET, 各向异性成像, (时间门控) 荧光强度成像
Pattern
Matching, 快速Pattern Matching |
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相关分析 |
FCS,
FCCS, FLCS, PIE–FCS |
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FRET |
PIE
(脉冲交错激发) |
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STED |
STED, 门控STED, STED-FLIM, 交错脉冲 STED及共聚焦, 分辨率估计 |
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荧光强度Trace |
分子闪烁(On/Off 柱状图), 计数率柱状图 (PCH), 爆发量柱状图, 强度门控制TCSPC, 荧光寿命 Traces, 寿命柱状图, BIFL |
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稳态各向异性 |
包含物镜校正系数 |
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导出数据格式 |
BMP, ASCII, TIFF, BIN |
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用户自定义脚本编译 (STUPSLANG) |
用户自定分析步骤, 拟合功能, 多条件筛选 |
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电脑CPU规格要求 |
四核或更高 |
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CPU主频 |
2.2 GHz (或更高) 四核 CPU |
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内存容量 |
最小4 GB (推荐16/32 GB) |
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操作系统 |
Windows 10 x64 |
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硬盘容量 |
>= 100 MB (不包括数据存储) |
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显示器 |
Full HD Display |
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加密方式(HASP) |
USB |
荧光寿命成像和相关软件SymPhoTime 64可以被用于时间分辨共聚焦数据采集实验，如：
- 时间分辨荧光
- 荧光寿命成像(FLIM)
- 磷光寿命成像(PLIM)
- 荧光相关光谱(FCS)
- 荧光寿命相关光谱(FLCS)
- 荧光共振能量转移(FRET)
- 超分辨显微(STED)
- 双聚焦荧光相关光谱(2fFCS)
- 脉冲交错激发(PIE)
- 单分子探测/光谱学
- Pattern Matching分析
- 时间分辨磷光(TRPL)
- TRPL成像
- 镧化物上转换
- 反聚束
Version features
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SPT64 1A |
SPT64 1 |
SPT64 2 |
SPT64 1+2 |
SPT64 1+2+3 |
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数据采集 |
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直接通过 TimeHarp 260, PicoHarp 300 或 HydraHarp 400采集TTTR数据 |
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控制Physik Instrumente平移台 |
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对激光扫描显微镜 (LSM)的支持及其他扫描台联用 |
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STED 成像, STED-FLIM, STED-FCS |
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路由多通道支持 |
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多单点采集 |
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数据分析 |
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时间门控功能 |
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TCSPC寿命柱状图拟合(最高5阶指数) 包括尾部拟合,解卷积拟合分析,最大相似估计法及自举误差分析 |
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荧光寿命成像 (FLIM) 包括在线成像,特定区域分析, 最大相似估计法和bitmap格式导出 |
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Pattern Matching, 快速Pattern Matching |
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荧光相关光谱 (FCS) 包括脉冲交错激发模式,及带有自举误差分析法的FCS拟合 |
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荧光寿命相关光谱 (FLCS) |
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实时FCS计算和Time Trace显示 ("在线 time traces", "在线-FCS") |
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总相关 |
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荧光共振能量转移 (FRET) 包括脉冲交错激发(PIE), 及直接激发和渗滤校正 |
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STED成像, STED FLIM, 门控STED, 脉冲交错 STED 和共聚焦, 分辨率估算 |
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多通道复用分析 – 寿命和强度 time traces |
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BIFL分析 |
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On/Off时间柱状图及分析 |
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爆发量柱状图 |
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PCH光子计数柱状图的计算 |
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ASCII格式数据导出 |
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脚本编译("STUPSLANG") |
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The following documents are available for download:
- Brochure about the SymPhoTime 64 software
- Pattern matching analysis using SymPhoTime 64
- Practical Manual for Fluorescence Microscopy Techniques